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interactome:experiments:20191122-2 [2019/11/22 17:51]
dan
interactome:experiments:20191122-2 [2019/11/22 17:58] (current)
dan
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 ## RNA extraction from HEK293T cells ## RNA extraction from HEK293T cells
-{{tag>protocol RNA kit interactome PersonalInteractome}}+{{tag>​interactome PersonalInteractome}}
  
 #### Material #### Material
Line 151: Line 151:
  
 ## 1st strand cDNA synthesis of RNA samples extracted on 20191122 ## 1st strand cDNA synthesis of RNA samples extracted on 20191122
-{{tag>​protocol RNA cDNA kit interactome PersonalInteractome}} 
  
 #### Material #### Material
Line 187: Line 186:
 ^ Total                     ​^ ​ 10                          ^  100                           ​| ​                                   | ^ Total                     ​^ ​ 10                          ^  100                           ​| ​                                   |
  
 +  *Aliquot to 10 x 10 µL
   *Incubate at 65˚C for 5 mins   *Incubate at 65˚C for 5 mins
   *Transfer tube to ice immediately ​   *Transfer tube to ice immediately ​
Line 199: Line 198:
   *Prepare master mix for reaction;   *Prepare master mix for reaction;
  
-^ Reagent ​                        ^ Volume per 1 reaction  ​|   Note  ^ +^ Reagent ​                        ^ Volume per 1 reaction ​(µL)  ​^ ​Volume per 5 reaction (µL)  ^ Note               
-| 5×PrimeScript II Buffer ​        | 4 μL                     ​      ​+| 5×PrimeScript II Buffer ​        | 4                           ​20                          ​                   
-| RNase Inhibitor(40 U/​μl) ​       | 0.5 μL(20 U)           |   |       +| RNase Inhibitor(40 U/​μl) ​       | 0.5                         | 2                           20U per reaction ​  | 
-| PrimeScript II RTase(200 U/​μl) ​ | 1 μL(200 U)            ​  ​      ​+| PrimeScript II RTase(200 U/​μl) ​ | 1                           ​5                           200U per reaction  ​
-^ RNase Free dH2O                 ​^ ​up to 20 μL            ​  ​      ​^+^ RNase Free dH2O                 ​^ ​4.5                         22.5                        ​                   ^
  
  
Line 221: Line 220:
   *The cDNA product should be stored at -20°C. ​   *The cDNA product should be stored at -20°C. ​
   *For downsteam PCR amplification,​ the volume of cDNA product should not exceed 1/10 of the PCR reaction volume.   *For downsteam PCR amplification,​ the volume of cDNA product should not exceed 1/10 of the PCR reaction volume.
 +
 +
 +^  Sample No.  ^  Date prepared ​ ^  Number of freeze ​ ^  Number of thaw  ^  "​Done"​ if used  ^
 +|  1           ​| ​ 20191122 ​      ​| ​ 1                 ​| ​ 0               ​| ​                 |
 +|  2           ​| ​ 20191122 ​      ​| ​ 1                 ​| ​ 0               ​| ​                 |
 +|  3           ​| ​ 20191122 ​      ​| ​ 1                 ​| ​ 0               ​| ​                 |
 +|  4           ​| ​ 20191122 ​      ​| ​ 1                 ​| ​ 0               ​| ​                 |
 +|  5           ​| ​ 20191122 ​      ​| ​ 1                 ​| ​ 0               ​| ​                 |
 +|  6           ​| ​ 20191122 ​      ​| ​ 1                 ​| ​ 0               ​| ​                 |
 +|  7           ​| ​ 20191122 ​      ​| ​ 1                 ​| ​ 0               ​| ​                 |
 +|  8           ​| ​ 20191122 ​      ​| ​ 1                 ​| ​ 0               ​| ​                 |
 +|  9           ​| ​ 20191122 ​      ​| ​ 1                 ​| ​ 0               ​| ​                 |
 +|  10          |  20191122 ​      ​| ​ 1                 ​| ​ 0               ​| ​                 |
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 ==Protocol last updated== ==Protocol last updated==
- --- //​[[daney@sfc.keio.ac.jp|Dan Yamamoto-Evans]] 2019/11/21 15:16// + --- //​[[daney@sfc.keio.ac.jp|Dan Yamamoto-Evans]] 2019/11/22 17:55//
-\\ +
-\\  +
-==Protocol used==+
  • interactome/experiments/20191122-2.1574412711.txt.gz
  • Last modified: 2019/11/22 17:51
  • by dan