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interactome:experiments:20191129 [2019/11/29 12:39]
dan
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 {{tag>​protocol POEM N-termDHFR interactome}} {{tag>​protocol POEM N-termDHFR interactome}}
  
-## RE check of potential pDN0513 samples.+## Back bone/ insert preparation for generating pDN0511
  
 #### Material #### Material
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 |        | Purified PCR product ​  ​| ​                 |            | POEM5 & POEM6     ​| ​                         | |        | Purified PCR product ​  ​| ​                 |            | POEM5 & POEM6     ​| ​                         |
 |        | ddH2O                  | Invurtogen ​      | 10977-015 ​ |                   ​| ​                         | |        | ddH2O                  | Invurtogen ​      | 10977-015 ​ |                   ​| ​                         |
-|        | XbaI             | NEB              |      |                   | 37C, Inactivated at 80C  | +|        | I-CeuI ​            | NEB              |      |                   | 37C, Inactivated at 80C  | 
-|        | XhoI                | NEB              |      |                   | 37C, Inactivated at 65C  |+|        | I-SceI ​               | NEB              |      |                   | 37C, Inactivated at 65C  |
 |        | 10x Cutsmart buffer ​   | NEB              | B7204      |                   ​| ​                         | |        | 10x Cutsmart buffer ​   | NEB              | B7204      |                   ​| ​                         |
 |        | FasGene PCR clean kit  | Nippon Genetics ​ | FG-91302 ​  ​| ​                  ​| ​                         | |        | FasGene PCR clean kit  | Nippon Genetics ​ | FG-91302 ​  ​| ​                  ​| ​                         |
  
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 ^  Check  ^  Reagent ​      ​^ ​ Volume (µl)   per reaction ​ ^  Final concenration ​     |^ Memo                   ^ ^  Check  ^  Reagent ​      ​^ ​ Volume (µl)   per reaction ​ ^  Final concenration ​     |^ Memo                   ^
-|         | ddH20          |  5                          |                    - |    |                        | +|         | 10x CS buffer ​ |  ​                          |                    1 | x  |                        | 
-|         | 10x CS buffer ​ |  ​                          |                    1 | x  |                        | +|         | DNA            |  ​21                          ​| ​                     |    | For gel extraction ​ | 
-|         | DNA            |  ​                         ​| ​                     |    | 1 µg should be enough ​ | +|         ​| ​I-CeuI        ​| ​  3                          ​|                      |    |                  
-|         ​| ​NotI-HF        ​| ​ ​1 ​                          |                      |    | 20U/​µL ​                +|         ​| ​I-SceI      ​|  ​                          |                      |    |                  
-|         ​| ​HindII-HF      ​|  ​                          |                      |    | 20U/​µL ​                +|         ^ Total (µL)     ​^  ​30                          ​| ​                     |    |                        |
-|         ^ Total (µL)     ​^  ​10                          ​| ​                     |    |                        |+
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-== Sanger sequence sample with right band pattern ​and proceed to I-SceI/​I-CeuI digestion.==+== Run gel and extract band.==
  
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  • interactome/experiments/20191129.txt
  • Last modified: 2019/11/29 12:51
  • by dan